2012-123
一、主要實驗材料1、培養(yǎng)液為F-DMEM。2、小鼠周齡為7～8w的性成熟母小鼠和周齡為8w的種公鼠。二、小鼠胚胎成纖維細胞（MEF）的培養(yǎng)1、小鼠胚胎的準備①性成熟母小鼠與種公鼠按1公（♂）:2母（♀）比例合籠。②每天早上觀察母小鼠陰道口。有乳白色或蛋黃色凍膠狀物（陰道栓）即確定為懷孕。④見栓當天上午定為懷孕的0.5d。③取懷孕12.5～14.5d母鼠,斷頸處死，無菌條件下暴露子宮。餿用鑷子提起近子宮頸端,分離子宮系膜,剪斷子宮角。⑤取出整個子宮,在無菌濾紙上吸干血跡,置于有...
查看更多2012-1128
1、免疫脾細胞的制備制備單克隆抗體的動物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質(zhì)。一般血清的制備，也可采用脾內(nèi)直接免疫法。2、骨髓瘤細胞的培養(yǎng)與篩選在融合前，骨髓瘤細胞應(yīng)經(jīng)過含8-AG的培養(yǎng)基篩選，防止細胞發(fā)生突變恢復(fù)HGPRT的活性（恢復(fù)HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活）。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，融合前24h換液一次，使骨髓瘤細胞處于對數(shù)生長期。3、細胞融合的關(guān)鍵:①技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。②融合試...
查看更多2012-1123
抗體monoclonalantibody；McAb1、定義1：能與相應(yīng)抗原（表位）特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。所屬學科：免疫學（一級學科）；免疫系統(tǒng)（二級學科）；免疫分子（三級學科）2、定義2：在人和動物體內(nèi)，由于抗原或半抗原入侵刺激機體而在細胞中產(chǎn)生的免疫球蛋白。能可逆、非共價、特異地與相應(yīng)抗原結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合體。所屬學科：生物化學與分子生物學（一級學科）；總論（二級學科）3、定義3：機體內(nèi)B細胞在抗原刺激下產(chǎn)生的具有特異性功能的球蛋白。所屬學科：水產(chǎn)學（一級...
查看更多2012-1121
一、優(yōu)點1、直接觀察活細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生命活動。用于細胞學、遺傳學、免疫學、實驗醫(yī)學和腫瘤學等多種學科研究。2、直接觀察細胞的變化可便于攝影。3、研究細胞種類如低等到高等到人類、胚胎到成體、正常組織到腫瘤。4、便于使用各種技術(shù)：相差、熒光、電鏡、組化、同位素標記等方法觀察和研究細胞狀況。5、是分子生物學和基因工程學的研究對象，也是其主要的組成部分。6、易于施用物理、化學生物的實驗研究。7、易于提供大量生物性狀相似的實驗對象,耗資少比較經(jīng)濟。8、成為生物制品單克隆抗體生產(chǎn)和基因...
查看更多2012-1114
1、紫外消毒過程中會產(chǎn)生臭氧分子，對人體有害。一般情況下，消毒后至少半小時后再進入。2、所有的實驗器材都要經(jīng)過消毒處理；所有的細胞操作都在安全柜中進行，每一步都要注意不能用手碰到瓶口，培養(yǎng)液不能碰到瓶口，拿培養(yǎng)瓶時要使培養(yǎng)瓶的瓶口微微翹起。3、細胞消化時間不能太長，要讓細胞盡快脫離不舒服的環(huán)境；離心時離心機轉(zhuǎn)速不能太高，實驗前要設(shè)定好離心轉(zhuǎn)速和時間；重懸細胞時要保證細胞*混勻，在顯微鏡下觀察細胞是一個一個的。4、傳代培養(yǎng)時要注意無菌操作并防止細胞之間的交叉污染。所有操作要盡量...
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1、化凍將血清（FetalBovineSerum，Hyclone）從－20℃冰箱取出，放于4℃冰箱化凍過夜；也可室溫（或浸于自來水中）化凍，化凍后若不馬上滅活，可以放入4℃冰箱暫時保存；2、滅活①放入室溫的水浴鍋內(nèi)開始加熱（同時放入一個內(nèi)裝200ml自來水的血清瓶，插入一根溫度計，溫度監(jiān)控以此為準）；②當溫度計顯示56℃時，控制在此溫度30分鐘±3分鐘；若不小心使溫度上升超過56℃，則：若仍未超過60℃，且時間很短（比如：不超過5分鐘），則仍可使用；若超過60℃...
查看更多2012-112
1、凍存條件：建議采用40-50%FBS+8%-10%DMSO+該細胞株無血清培養(yǎng)基2、凍存方法：①梯度凍存：4℃——1h；-20℃——30min；-80℃——過夜②使用凍存盒：直接放入-80℃冰箱中過夜（有些細胞不適應(yīng)此種方法）3、復(fù)蘇方法：①打開水浴，將培養(yǎng)基放入水浴中，待其穩(wěn)定至37℃；②細胞從液氮內(nèi)取出后，應(yīng)快速將細胞放于37℃水浴中，輕輕振搖，使其溶化，（盡量避免溶化前凍存管脫離水?。?；③將溶化后將細胞凍存懸液離心，轉(zhuǎn)速1000rpm，3min,后棄去上清，使細胞重...
查看更多2012-1026
細胞生長要求嚴格的無毒無污染環(huán)境，因此必須注意培養(yǎng)室的清潔衛(wèi)生，保持操作空間的無菌條件。1、培養(yǎng)室應(yīng)為獨立、封閉的空間。培養(yǎng)室及緩沖間都應(yīng)保持整潔，不要隨意出入；2、保持超凈工作臺的無菌環(huán)境，每次使用前打開紫外燈照射消毒15—30分鐘；每次使用后將廢棄物清理干凈，各用具規(guī)放整齊，用70%酒精擦凈臺面，再打開紫外燈照射30分鐘以上；3、定期擦洗桌面、地板、清潔培養(yǎng)室，并用0.1%的新潔爾滅溶液消毒；定期打開培養(yǎng)室的大紫外燈，將整個房間進行照射消毒；4、每次打開培養(yǎng)箱前，或手伸入...
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